循环肿瘤细胞检测：在进展性转移性乳腺癌患者中的前瞻性比较

循环肿瘤细胞检测：在进展性转移性乳腺癌患者中的前瞻性比较

    循环肿瘤细胞(CTC)可以通过简单的抽血以无创的方式捕获和研究，重复采样的便利性也为时间肿瘤异质性的分类提供了希望。除了CTCs的生物学研究，其计数已被证明对转移性乳腺癌患者的无进展(PFS)和总生存(OS)有预后影响。

    CellSearch系统是唯一一种获得FDA批准的CTC检测技术。该方法将CTC与带有EpCAM的磁性颗粒组成的铁磁流体混合，从全血中分离出来。磁性吸取CTCs后，应用免疫荧光标记的上皮细胞单克隆抗体(CK8/18/19)、白细胞(CD45)和核染料(DAPI)进行多重染色，最后用半自动荧光显微镜观察细胞。CellSearch检测到CTCs数量升高，定义为每7.5 mL血液中 5个或更多，这是PFS和OS的一个显著的负面预后因素。

    RareCyte CTC检测平台由AccuCyte®样品制备系统和CyteFinder仪器组成。CTC是根据密度使用专利研发的收集管设备分离的。首先从红细胞中分离出有核细胞，然后将它们铺在8个标准玻片上，这些玻片最多可以用6种荧光标记进行染色。在这项研究中，三通道荧光染色试剂盒用于CD45、SYTOX橙(一种核染料)、全细胞角蛋白和EpCAM混合抗体。这些载玻片然后由CyteFinder仪器(一种数字扫描显微镜)成像并进行自动分析。理论上，RareCyte在CTC检测灵敏度方面优于CellSearch。一个主要的区别是，RareCyte在样品显示前不使用膜标记进行阳性选择，而CellSearch只富集Epcam阳性细胞。另一方面，CellSearch的可重复性和临床有效性已在几种癌症类型中被记录，而这类数据在RareCyte中很少。

    本研究的目的是比较CellSearch和RareCyte平台检测到的CTC计数，并评估在进行性MBC患者大量前瞻性血液样本中由CTC阈值定义组的生存结果。三阴性乳腺癌患者的亚组令人关注，因为已有研究表明，该亚组的特点是EpCAM表达水平较低，因此可能具有被RareCyte平台检测到而不能被CellSearch检测到的CTC。

结果           

图1 患者和相关样本示意图

CellSearch和RareCyte的CTC计数比较

    收集100对血液样本，使用CellSearch和RareCyte系统测定CTC计数。在7.5毫升血液中至少检测到一个CTC 的样本有65 - 75%。CellSearch系统的CTC计数范围为0-2289，中位数为3个 CTC；RareCyte 系统的CTC计数范围为0-1676，中位数为3个 CTC。在7.5 mL血液中，满足CellSearch验证的5个或5个以上CTC预后相关切除率的样本数量在CellSearch实验中为45%，在RareCyte实验中为48%。

表1 分类配对CTC计数分布

    当CTC阈值为1时，两个系统的阳性检测结果存在数值差异（表1），使用RareCyte平台时，10个样本中至少检测到1个CTC，而CellSearch平台则没有，而相反情况只有3个样本。

    CellSearch和RareCyte系统定量的CTC计数具有很强的相关性(Spearman’s r = 0.823 (0.7443-0.8782) P＜0.001)。

图2 CellSearch和RareCyte检出相关性

    每7.5 mL血液中CellSearch计数为5个或更多的患者死亡风险显著增加。与少于5个ctc的患者相比，风险比为5.164。生存分析与RareCyte CTC计数应用相同的截止点重复。在每7.5 mL血液中有5个或更多ctc的患者中，患者生存率再次显示显著受损，风险比为4.213 (2.153-8.244)(p < 0.001)。

    综上数据表明：CellSearch和RareCyte CTC计数平台在MBC患者中的分析和预后等效性，这是RareCyte平台首次展示预后的重要性。

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参考文献

Dirix, Luc et al. “Circulating tumor cell detection: A prospective comparison between CellSearch® and RareCyte® platforms in patients with progressive metastatic breast cancer.” Breast cancer research and treatment, 10.1007/s10549-022-06585-5. 9 Apr. 2022, doi:10.1007/s10549-022-06585-5.